Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細胞     Mach1-T1 Chemically Competent Cell 

基因型：

F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1 tonA

簡要說明：

Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態(tài)細胞之一，在平板上 9 h 可見克隆，缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒 DNA 的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性；lacZ M15 的存在使 Mach1-T1 可用于藍、白斑篩選；tonA 突變賦予 Mach1-T1 菌株對噬菌體T1 和 T5 的抗性。Mach1-T1 感受態(tài)細胞 經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>5x108 cfu/μg DNA

操作說明：

1.Mach1-T1 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA（質?；蜻B接 產物）并用手打 EP 管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌2YT 或 LB培養(yǎng)基，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 60 分鐘。

4.5000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 13 h。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間 存放會降低轉化效率。

2.混入目的 DNA 時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。