Turbo Chemically Competent Cell

基因型：

F'proA+B+ lacIqΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lac-proAB) glnVgalK16 galE15 R(zgb-210::Tn10) TetS endA1thi-1 Δ(hsdSmcrB)5

簡要說明：

Turbo 菌株是生長最快的大腸桿菌菌株。平板上6.5 小時可見克隆，營養(yǎng)液中搖菌 4-6小時可提取質(zhì)粒，缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；Turbo 菌株可嚴格控制 laclq的表達，可以克隆毒性基因；fhuA2 突變賦予Turbo 菌株對噬菌體 T1的抗性； lacZΔM15的存在使 Turbo可用于藍、白斑篩選。Turbo感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1. Turbo 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物） 并用手bo打 EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25 分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒，迅速放回冰上并靜置 2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌SOC 或LB培養(yǎng)基，混勻后 37℃，200 rpm復(fù)蘇 60分鐘。 

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB培養(yǎng)基上。 

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng) 6.5 小時以上。

注意事項：

1. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8 分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入目的 DNA 時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。